疾病防控常用Elisa試劑盒
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除了疾病防控常用Elisa試劑盒本司還有登革，瘧疾，錐蟲(chóng)，恙蟲(chóng)，黑熱病，西尼羅河，乙腦，基孔肯雅熱，鉤端螺旋體，立氏克體，等科研診斷試劑
- 產(chǎn)品描述
疾病防控常用Elisa試劑盒
儲存和使用期：2-8°C （本司還有登革，瘧疾，錐蟲(chóng)，恙蟲(chóng)，黑熱病，西尼羅河，乙腦，基孔肯雅熱，鉤端螺旋體，立氏克體，等科研診斷試劑）
應用：用于定性檢測人血清，血漿，細胞培養上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。
疾病防控常用Elisa試劑盒介紹
黃熱病，歷*稱(chēng)為黃色杰克，黃色瘟疫或青銅約翰，是一種急性病毒性疾病。在大多數情況下，癥狀包括發(fā)熱，寒戰，食欲不振，惡心，特別是在背部的肌肉痛，和頭痛。癥狀通常在五天內改善。在一些人在一天內改善，發(fā)燒回來(lái)，腹痛發(fā)生，肝損傷開(kāi)始導致黃色皮膚。如果發(fā)生這種情況，出血和腎臟問(wèn)題的風(fēng)險也增加。
測定原理
96孔板YFV-IgM特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。 TMB底物用于顯現HRP酶反應。 TMB由HRP催化以產(chǎn)生在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的藍色產(chǎn)物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM量成比例。外徑在微板讀數器中在450nm下通過(guò)分光亮度計測量吸亮度，然后可以計算YFV-IgM的濃度。
套件組件
- 一個(gè)96孔板預涂
- 陽(yáng)性對照：0.5ml
- 陰性對照：0.5ml
- 洗滌緩沖液（30×）：20 ml。稀釋?zhuān)?:30
- 樣品稀釋緩沖液：6ml
- 6HRP酶聯(lián)試劑（RTU）：6ml
- 終止液：6ml
- TMB底物：6ml
- TMB底物B：6ml
- 板密封：2
- 密封袋：1
需要材料但不提供
1.37℃培養箱
2.酶標儀（波長(cháng)：450nm）
3.精確的移液器和一次性移液器吸頭
4.自動(dòng)洗板機
5.ELISA振蕩器
1.5ml管
7.板蓋
8.吸收濾紙
9.100ml和1L體積量筒。
使用程序:
A.制備樣品和試劑
1. 樣品
收集并立即分析測試樣品（2小時(shí)內）后立即分離?；虻确植㈤L(cháng)期儲存在-20°C。避免多個(gè)凍融循環(huán)。
?細胞培養上清：以約2000-3000×rpm離心20分鐘，以去除沉淀，立即分析或分裝，并儲存于-20℃。
?血清：在室溫下凝結血清（約4小時(shí)）。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分，并儲存在-20°C。
?血漿：用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
尿：在無(wú)菌容器中收集，以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分，并存儲在-20°C冷凍。
組織：組織勻漿的制備將根據組織類(lèi)型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。稱(chēng)重樣品并用PBS（Ph 7.4）勻化，并對細胞懸浮液進(jìn)行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。
注意：
1.*凝結血液樣品，離心，避免溶血和沈淀。
2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑，因為它抑制HRP。
2.洗滌緩沖液
用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍（1/30）（即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中）。
B.測定程序
在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個(gè)測試的標準曲線(xiàn)。
1.在預涂板上分別設置陽(yáng)性/陰性，測試樣品和對照（零）孔，并記錄它們的位置。
2.將50μl的陰性和陽(yáng)性對照等分到設定的孔中。
3.向對照（零）孔中加入50μl樣品稀釋緩沖液。
4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品。在底部加入溶液而不接觸側壁。搖動(dòng)平板以混合內容物。
5.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
6.取下蓋子并通過(guò)在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來(lái)丟棄板內容物。
7.棄去溶液，用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時(shí)候*干燥。
手動(dòng)清洗：丟棄溶液，不要接觸側壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿(mǎn)每個(gè)孔，并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內容物，并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自動(dòng)洗滌：棄去所有孔中的溶液，并用洗滌緩沖液洗滌板5次（用緩沖液過(guò)量填滿(mǎn)孔）。在zui后的洗滌之后，翻轉該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時(shí)間。
8.向每個(gè)孔中加入50μlHRP結合物的試劑（對照孔除外）。在每個(gè)孔底部加入溶液，不要接觸側壁。
9.用蓋子密封板，并在37℃孵育30分鐘。
10.取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板5次。
11.向每個(gè)孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。
12.向每個(gè)孔中加入50μl終止液，充分混勻。顏色應立即變?yōu)辄S色。
13.閱讀O.D.在微板讀數器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內。對于計算，（相對O.D.450）=（每個(gè)孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。標準曲線(xiàn)可以作為每種標準溶液（Y）的相對O.D.450與標準溶液（X）的相應濃度作圖?？梢詮臉藴是€(xiàn)插入樣品的人類(lèi)YFV-IgM濃度。
14.注意：如果稀釋樣品，稀釋倍數乘以?xún)炔宸ǖ玫较♂屒暗臐舛取?/p>
C.結果確定
1.試驗有效性：陽(yáng)性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。
2.臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=負控制的平均值+0.15
3.陰性結果：如果OD值<CUT OFF，樣品為人YFV-IgM陰性。
4.陽(yáng)性結果：如果OD值≥CUTOFF，樣品為人類(lèi)YFV-IgM陽(yáng)性。
D.注意事項
1.在實(shí)驗之前，離心每個(gè)試劑盒組分數分鐘，將所有試劑倒入試管底部。
2.在混合或重新組裝部件時(shí)避免起泡或氣泡。
3.洗滌緩沖液可結晶并分離。如果發(fā)生這種情況，請加熱管以溶解。
4.建議每個(gè)對照和樣品一式兩份或重復測量三次。
5.不要讓板在任何時(shí)候*干燥！這可以使板上的生物材料失活。
6.不要重復使用移液器吸頭和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中過(guò)期的組件或組件。
8.將TMB底物B儲存在黑暗中，并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應，建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量，不要將殘留溶液倒回到小瓶中。
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